对照分别为肺鳞癌、胃腺癌和乳腺浸润性导管癌，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判读
β-cat和E-cad在细胞膜、细胞质及细胞核中均有阳性表达，基于本研究目的，以细胞膜及细胞质着色为阳性表达，P53为细胞核着色。应用双评分半定量法判断阳性细胞染色深度和阳性细胞百分率，具体标准参照文献[6]。
1.4 统计学处理
数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析，三种蛋白的表达与临床病理特征的关系及三者之间的相互关系采用χ2检验及四格表相关分析，检验水准α=0.05。应用多因素COX比例风险模型，比较相对危险度，分析各因素对生存率的影响。
2 结果
2.1 食管鳞癌组织中β-cat、P53、E-cad的表达与临床病理参数的关系
226例食管鳞癌中β-cat、P53、E-cad和的阳性率分别为34.51%、70.35%、67.26%。β-cat、P53和E-cad阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无相关性（P>0.05）。侵犯浆膜层组β-cat阳性率（56.41%）高于未侵犯浆膜层组（22.97%），淋巴结转移组的β-cat阳性率（46.94%）高于无淋巴结转移组（31.07%），Ⅲ+Ⅳ期组的β-cat阳性率（45.21%）高于I+Ⅱ期组（29.41%），差异均有统计学意义（P<0.05）。未侵犯浆膜层组P53阳性率（60.14%）低于侵犯浆膜层组（92.30%），无淋巴结转移组的P53阳性率（66.10%）低于淋巴结转移组（85.71%），Ⅲ+Ⅳ期组的P53阳性率（91.78%）高于Ⅰ+Ⅱ期组（60.13%），差异均有统计学意义（P<0.05）。侵犯浆膜层组E-cad阳性率（38.46%）低于未侵犯浆膜层组（82.43%），淋巴结转移组的E-cad阳性率（38.76%）低于无淋巴结转移组（75.14%），Ⅲ+Ⅳ期组的E-cad阳性率（31.51%）低于Ⅰ+Ⅱ期组（84.31%），差异均有统计学意义（P<0.05）（表1）。
2.2 食管鳞癌组织中β-cat 和E-cad、P53阳性表达之间的相关性分析
食管鳞癌组织中E-cad表达与P53呈负相关（r=-0.685，P=0.007），E-cad表达与β-cat表达也呈负相关（r=-0.637，P=0.005），而β-cat与P53表达呈正相关（r=0.825，P=0.002）。
2.3 COX比例风险模型分析β-cat、 P53和E-cad及各临床特征对患者预后的影响
多因素COX比例风险模型分析结果显示，肿瘤临床分期、β-cat、P53和E-cad进入模型中。临床分期、β-cat和P53表达与患者生存率呈负相关（P<0.05），E-cad表达与患者生存率呈正相关，差异有统计学意义（P<0.05）。相对危险度分析提示，临床分期对预后影响最大，其次为P53、β-cat，E-cad对患者预后影响最小（表2）。
表2 COX比例风险模型预后分析
3 讨论
细胞间钙黏附系统破坏是癌细胞发生浸润、转移的关键起始步骤。E-cad为近年来颇受关注的钙依赖性糖蛋白，广泛分布于上皮细胞，其主要作用是介导细胞间黏附反应，其在多种肿瘤中表达下调，降低细胞间连接，从而促进肿瘤细胞的浸润、转移[4，7-9]，有研究[10]认为，启动子区域甲基化导致E-cad基因转录抑制是食管癌发生的重要机制之一。本研究结果显示，E-cad表达与临床分期相关（P<0.05），其Ⅲ+Ⅳ期患者阳性率明显低于Ⅰ+Ⅱ期患者，提示E-cad功能下降致食管鳞癌细胞黏附性下降及侵袭性增强，对食管癌进展有重要作用；淋巴结转移组E-cad阳性率低于无淋巴结转移组（P<0.05），提示E-cad表达降低的食管鳞癌细胞更易发生淋巴结转移。COX比例风险模型预后分析结果表明，E-cad表达与患者生存率呈正相关，相对危险度为0.191（P<0.05），提示E-cad阳性表达的患者预后好于E-cad阴性表达患者。
Wnt/β-cat是经典的Wnt信号转导途径，是调节细胞增殖、分化及迁移的关键途径。有研究[5，8-9，11-13]显示，β-cat异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关。本研究结果显示，β-cat高表达与肿瘤浸润深度、临床高分期及淋巴结转移呈显著相关（P<0.05），相关因素分析显示，其与患者生存呈明显负相关，其相对危险度为3.673，提示β-cat阳性表达患者预后要差于阴性表达患者。王媛媛等[14]研究发现，胃癌中β-cat和E-cad的表达与肿瘤的浸润、转移有关，而对于两者在食管中的研究较少。本研究同时分析β-cat和E-cad在食管鳞癌中的表达，发现两者呈负相关，同时检测β-cat和E-cad可能为评估食管鳞癌预后提供重要的参考价值。
P53是大家所熟知的一种肿瘤抑制基因，分为野生型和突变型两种类型，其中突变型在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用，与患者预后明显相关。P53突变是食管癌组织中公认的发生分子水平的改变，其结果导致转移率的升高，与患者术后生存期缩短密切相关，该基因突变可作为一种独立可靠的生物学指标来判断患者的预后[3]，本研究结果显示，P53阳性表达的食管鳞癌高浸润和高分期呈正相关，与王伟等[15-16]的研究结果一致。关于食管鳞癌中P53表达与β-cat和E-cad表达三者之间关系的研究相对较少。吴永廉等[17]研究发现，β-cat和E-cad的异常表达与食管癌的发生、发展有关，也与本研究结果一致。本研究同时分析三者与食管鳞癌患者预后的关系，提示三者在食管鳞癌的发生、发展及转移能存在协同作用，但具体作用机制有待进一步研究。
综上所述，β-cat、P53和E-cad在食管鳞癌的发生、发展及转移中存在相互协调作用，但具体机制尚未完全清楚，有待进一步深入研究。联合检测β-cat、P53和E-cad可以为准确评估食管鳞癌预后的重要指标，从而为临床合理选择靶向治疗药物提供重要参考依据。
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（收稿日期：2015-02-14 本文编辑：许俊琴）
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