ＨＳＰ２７ｍｋＮＡ在食管鳞癌组织中表达的研究

[摘要]目的　探讨HSP27mRNA在食管鳞癌组织中的表达情况。方法采用组织原位杂交技术检测36例食管癌组织，癌旁组织和正常组织中HSP27mRNA的表达。结果Hsp27mBNA在食管鳞癌组织中的染色主要定位于胞浆，呈灶性或弥漫性分布，而在切缘正常粘膜中，呈点状或灶性分布；食管鳞癌组织和癌旁组织的HSP27mRNA表达差别无统计学意义(P>0.05)，二者与正常食管粘膜相比，差别均具有统计学意义(P<0.005，p<0.005)。结论食管鳞癌组织和癌旁组织中HSP27mRNA的表达水平与正常食管粘膜相比均明显升高，提示HSP27mRNA在食管鳞癌中高表达。

[关键词]　食管癌；HSP27mRNA；原位杂交

[中图分类号]R735.1　[文献标识码]A　[文章编号]1672-4208(2009)07-O009-02

随着近年来对热休克蛋白HSP27研究的不断深入，它与肿瘤的关系逐渐受到广泛关注，尤其是HSP27与多种肿瘤预后的关系，成为肿瘤学研究和临床工作者关注的热点领域。已经有学者证实了食管鳞癌组织中HSP27蛋白水平表达高是预后好的标志，为进一步探讨食管鳞癌组织中HSP27在mRNA水平上的表达情况以及在食管鳞状上皮癌变中的可能作用，我们用组织原位杂交方法，从mRNA水平对比研究了食管鳞癌组织、癌旁组织和正常食管粘膜中的表达情况，为食管癌早期诊断和疗效及预后判断指标提供数据支持，并为寻找肿瘤治疗的新靶点提供一定的理论依据。

1　材料和方法

1.1　临床资料　本实验收集的36例标本均取自2008年4～12月泰安市中心医院肿瘤外科食管癌手术切除病例，癌组织经病理证实为鳞状细胞癌；癌旁组织取自癌缘外2 cm以内的食管粘膜，且经病理证实；正常食管组织取自癌缘外5cm以上的食管粘膜。所有患者术前均未接受过放射或化学治疗，36例中男性22例，女性14例，年龄49～76岁，平均60岁，19例有区域淋巴结转移，17例无淋巴结转移，仅有1例病理类型为低分化鳞癌，临床分期均为T3或T4期。

1.2　本处理标　本离体后，及时予以固定。固定液为4％多聚甲醛/0.1 M PBS(pH7.0～7.6)，含有1/1000DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4 mm的小块，固定1h。常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度4μm。

1.3　试剂　HSP27mRNA组织原位杂交检测试剂盒、原位杂交专用盖玻片、POLY－L－LYSINE DEPC；20％甘油缓冲液(3％柠檬酸，2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC，原位杂交用PBS)购自武汉博士德生物技术有限公司。

1.4　组织原位杂交方法检测HSP27mRNA表达及结果判断通过预杂交、杂交，DAB显色等步骤进行组织原位杂交，HSP27 mRNA的细胞胞浆着色呈棕黄色。以棕黄色为阳性信号，按照染色深浅，分为弱阳性(+)、阳性(++)与强阳性(+++)。

1.5　统计学方法采用SPSS11.5统计软件包进行处理，统计方法采用X²检验。

2　结果

2.1　Hsp27mRNA在食管鳞癌组织中的表达情况结果显示Hsp27mRNA在食管鳞癌组织中的染色主要定位于定位于胞浆，呈灶性或弥漫性分布，而在切缘正常粘膜中，呈点状或灶性分布。(见图1、2、3)

2.2　HSP27 mRNA在食管鳞癌组织、癌旁组织和正常食管粘膜中的表达比较食管鳞癌组织和癌旁组织的HSP27mRNA表达差别无统计学意义(P>0.05)，二者与正常食管粘膜相比。差别均具有统计学意义(P<0.005，P<0.005)。提示食管鳞癌组织和癌旁组织中HSP27mRNA的表达水平与正常食管粘膜相比均明显升高。见表1。

3　讨论

热休克蛋白(HSP)是在处于高温环境的细胞中被发现的，后来研究证实它们的合成受很多应急因素的影响，如感染、缺血、中毒以及恶变等。根据分子量的大小将其分成不同的亚家族，HSP27是其中分子量较小的一员，广泛地存在于各种生物细胞和肿瘤细胞中。HSP27的主要生物学功能是保护细胞免受各种应急因素的损伤，是重要的分子伴侣。细胞骨架是细胞重要的组成成分，维持着细胞正常形态和功能。HSP27可以和细胞骨架蛋白一肌动蛋白(actin)结合，防止actin的破坏，维护细胞骨架的稳定性和完整性。此外。HSP27还参与细胞的增殖和分化。研究证实HSP27在人体肿瘤组织中的表达与正常组织相比发生了改变，而且不同肿瘤组织中HSP27的表达并不一致，作用也不相同。HSP27在胃癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌以及食管腺癌等腺体组织中高表达是预后不良的标志。这可能与HSP27促进细胞增殖和抑制肿瘤细胞凋亡的生物学作用有关。然而根据我们的研究结果和国外文献报告显示在食管鳞癌组织和口腔鳞癌组织中HSP27蛋白水平表达高是预后好的标志。在复习有关HSP27的文献之后，我们进一步发现即使在同一粘膜组织中，因病变不同HSP27蛋白表达水平也有差异，Kapranos发现不典型增生的胃粘膜中HSP27的表达高于正常粘膜，且与不典型的程度呈正比，在胃癌中也呈高表达。而Leonardi发现在口腔粘膜中HSP27的表达却是正常粘膜高于癌前病变和鳞癌组织，在分化差的组织中表达下调，在分化好的组织中表达上调。但以上的研究结果均是关于HSP27蛋白表达水平变化的，HSP27mRNA水平是否与其蛋白水平变化一致，有关报道甚少。因此，本文应用组织原位杂交技术检测了HSP27mRNA在36例食管鳞癌、癌旁和正常食管粘膜中的表达，结果显示HSP27mRNA在食管鳞癌和癌旁中的表达比正常食管粘膜明显升高(P<0.005)，HSP27mRNA水平与HSP27蛋白水平变化一致。尽管有报道HSP27蛋白表达水平与肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度和淋巴结转移有关，仍有结果显示HSP27mRNA的表达在不同年龄、性别和淋巴结有无转移之间的差别均无统计学意义，提示HSP27mRNA表达水平的改变与这些临床病理特征无关，HSP27在影响食管鳞癌生物学行为方面有其独特的作用机制。

本文通过采用组织原位杂交方法检测发现HSP27mRNA在食管鳞癌和癌旁组织中表达与食管正常粘膜相比明显升高，为将来HSP27用于食管鳞癌的生物治疗提供了一定的理论依据，我们认为HSP27可能与阻止食管鳞癌侵袭转移相关，可能是阻止其转移的关键分子之一，研究结果将为抗食管鳞癌转移研究和药物的筛选提供有用的研究信息和药物分子靶标，虽然对HSP27的生物学功能有了比较深的了解，但仍有许多问题需要进一步研究。