摘要[目的] 考察微粉化技术对中药材金银花的显微特征以及溶出度的影响。[方法]显微镜下观察金银花普通细粉与超微细粉的显微特征区别，并以绿原酸含量为指标，采用紫外分光光度法测定金银花超微细粉与普通细粉的溶出度。[结果]2种金银花粉末显微镜下观察有明显差异；绿原酸含量超微细粉（10 μm）>普通细粉（80目筛）。[结论]微粉化技术对金银花粉末显微特征和溶出度影响明显。
关键词微粉化技术；金银花；超微细粉；普通粉；显微特征；含量测定
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）23-07736-02
基金项目山西省科技厅资助项目（20110321081-02）。
作者简介张璐（1978- ），男，山西阳泉人，工程师，硕士，从事中药提取、中药制剂研究。
收稿日期20140709金银花（Flos lonicerae）为忍冬科植物忍冬、红腺忍冬、山银花或毛花柱忍冬的干燥花蕾或帶初开的花。金银花具有抗菌和增强机体免疫功能的作用，味甘、性寒、清热解毒、凉散风热[1]，其医疗作用十分广泛。现代研究表明，绿原酸和异绿原酸作为金银花的主要成分有多种药理活性，具有显著的清热解毒、抗菌消炎和延缓衰老作用，对消化道的癌症有明显的抑制作用，还具有生育作用及对免疫系统的调节作用[2]。因此绿原酸含量的高低是目前金银花品质优劣的主要指标。
微粉化技术是近年兴起并应用于中药领域的一项新技术。中药材经过超微粉碎后，粒度均匀细密，并可使细胞壁破碎，增加了药材的比表面积，理论上有利于药物有效成分的溶出，增加药材有效成分的提取率[3]。但每味中药微粉化后是否都能达到上述效果，有待进一步研究。该试验以金银花绿原酸含量为指标，探求超微粉碎是否有利于中药材金银花有效成分的溶出。
1材料与方法
1.1试验药材与试剂金银花药材购于山西省双鹤药业有限公司，经普通粉碎过80目筛为普通粉，超微粉碎于江苏华强纳米科技有限公司；绿原酸对照品：中国药品生物制品检定所，批号110753200413；甲醇（分析纯）：北京市化工试剂厂，批号20060233；无水乙醇（分析纯）：北京市化工试剂厂，批号20030520；水合氯醛（分析纯）；稀甘油（化学纯）。
1.2试验仪器离心机：802（上海分析仪器器械厂）；超声波提取器：KQ250B（江苏省昆山市超声仪器厂）；电热恒温水浴锅：HH4（常州市国华电器有限公司）；电子天平：JA1203（上海天平仪器厂）；高速万能粉碎机（北京市科华永兴仪器有限公司）；紫外可见分光光度计：UV757CRT（上海精密科学仪器有限公司）；生物光学显微镜：CHD212E（日本奥林巴斯株式会社）；OLMYPUS倒置荧光显微镜：IX7型（日本奥林巴斯株式会社）。
1.3试验方法
1.3.12种不同粉末显微比较观察。
1.3.1.1超微细粉与普通细粉显微装片。分别取超微细粉与普通细粉少量置于载玻片上，加适量水合氯醛，于酒精灯上微热进行透化，稀甘油固定后，盖上盖玻片，得到显微装片。
1.3.1.2显微装片的显微镜观察[4]。 将制得的金银花超微细粉与普通细粉装片于显微镜下观察，普通细粉观察目镜10X、物镜40X， 超微细粉观察目镜10X、物镜40X，比较2种粉末显微特征的区别，并进行照相。
1.3.2含量测定[5]。
1.3.2.1对照品的制备。精密称取五氧化二磷真空干燥24 h的绿原酸对照品2.0 mg溶于2 ml甲醇，用移液管吸取0.5 ml，置于10 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，制成50 μg/ml的对照品溶液。
1.3.2.2样品溶液的制备。取金银花细粉及超微粉粉末样品各0.5 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声30 min，擦干外壁水分，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml于25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成样品溶液。
1.3.2.3测定波长的选择。吸取对照品溶液1.0 ml置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀释值刻度，紫外扫描显示327 nm处有最大吸收，每隔1 h复测，结果10 h内无变化。
1.3.2.4标准曲线的绘制。分别吸取对照品0.5、0.8、1.0、1.5、1.8、2.0 ml置于10 ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，制成浓度分别为2.5、4.0、5.0、7.5、9.0、10.0 μg/ml的溶液，在327 nm波长处测其吸光度，绘制标准曲线。
1.3.2.5样品含量测定。将超微细粉样品与普通细粉样品溶液分别稀释10倍，超微细粉标为1号样品，普通细粉标为2号样品，分别在327 nm波长处测定其吸光度。
2结果与分析
2.1超微细粉与普通细粉显微观察结果与分析从 OLMYPUS IX7型倒置荧光显微镜拍摄的图片（a）可以看出，金银花细粉中的花粉粒多见完整细胞，而超细粉中的花粉粒多见破壁细胞；从金银花细粉和超细微粉非腺毛（b）可以看出，金银花细粉中非腺毛多见细长完整细胞，而超细粉中的非腺毛多为破碎细胞。
2.2样品含量测定通过“1.3.2.4”方法，绘制标准曲线，注：a1、b1为细粉；a2、b2为超细微粉。
金银花细粉超细微粉花粉粒（a）、非腺毛（b）发现金银花超微细粉与普通细粉在2.5～10.0 μg/ml内呈线性，其线性回归方程为：A=0.086 4C+0.005 3（R=0.994）。利用紫外分光光度法分别测定了金银花普通细粉（80目）、超微细粉粉末绿原酸的含量，结果表明，经过超声提取后，金银花的有效成分绿原酸含量超微细粉比普通细粉（80目）提高14.4%（）。
金银花超微细粉与普通细粉在327 nm波长处的吸光度
测定次数1号样品（超微细粉）2号样品（普通细粉）A（第一次）0.3890.358A（第二次）0.3880.362A（第三次）0.3890.363A（平均值）0.3890.361
3结论与讨论
显微特征比较和含量测定表明，金银花连翘经过超微粉碎后，细胞破壁明显，大部分细胞已没有完整结构，药物的有效成分不需要经过细胞壁和细胞膜的交换过程而被溶提出来，中药有效成分的释放量大幅度提高，超微粉碎非常有利于中药材金银花有效成分的溶出，且可大大简化提取工艺过程，有利于降低生产成本。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005：117-118.
[2] 任兵，陆蕴如.我国药用金银花资源，化学成分及药理研究进展[J].中国药学杂志，1999，34（11）：724-727.
[3] 王宏洁，司南，边宝林.饮片超微粉碎前后主要有效成分溶出量的对比研究[J].中国中药杂志，2004，29（11）：1111-1112.
[4] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典-中药粉末显微鉴别彩色图集[M].广州：广东科技出版社，1999.
[5] 韩梅海，成爱华.复方大青叶合剂中的靛玉红、绿原酸含量测定方法的研究[J].
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