猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展

摘要猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪急性高度接触性肠道传染病，主要临床症状表现为呕吐、水样腹泻、脱水等。近年来，PED在全球范围内暴发流行，使养猪业遭受巨大的经济损失。对猪流行性腹泻的检测方法（病毒的分离和鉴定、免疫电镜法、免疫学检测法、分子生物学检测等）进行了综述，以期对猪流行性腹泻病毒的防控提供理论依据。

关键词猪流行性腹泻病毒；检测技术；研究进展

中图分类号S852.65+1文献标识码

A文章编号0517-6611（2018）25-0022-04

Research Progress on the Detection Technique of Porcine Epidemic Diarrhea Virus

RUI Congjie1，2，PAN Xiaocheng1，SHEN Xuehuai1 et al

（1.Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science，Anhui Academy of Agricultural Science，Hefei，Anhui 230031；2.College of Animal Science and Technology，Anhui Agricultural University，Hefei，Anhui 230061）

AbstractPorcine epidemic diarrhea （PED），caused by porcine epidemic diarrhea virus （PEDV），is a highly contagious，acute enteric viral disease of swine characterized by vomiting，watery diarrhea，dehydration and death.In recent years，swine epidemic diarrhoea has become a global epidemic.As a result，the pig industry has suffered huge economic losses.This paper reviewed the methods to detect PEDV，such as isolation and identification of PEDV，immunoelectron microscopy methods，immunological methods and methods in molecular biology，so as to provide theoretical basis for prevention and control of porcine epidemic diarrhea virus .

Key wordsPorcine epidemic diarrhea virus；Detection technique；Research progress

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的猪急性高度接触性肠道传染病，主要表现为呕吐、水样腹泻、脱水等特征[1-2]。各年龄猪只均可发病，但以10日龄以内哺乳仔猪的病死率最高。该病最早于1971年在英格兰猪群中首次发现[3]。 1982年，比利时Pensaert等[4]分离出不同于传染性胃肠炎的病毒，将其命名为类冠状病毒CV777株； 随后英国、德国、捷克、匈牙利等国家相继报道有该病的发生。20世纪80年代，日本、韩国、泰国等亚洲国家也陆续有该病的报道。我国于1973年首次报道出现PEDV的感染，并于1982年分离该病毒获得成功[5]。自2010 年底以来，我国大部分地区暴发了由PEDV变异毒株引起的腹泻，此次疫情的临床症状较为严重，初生仔猪的病死率可达90%[6]，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。目前，该病在全球肆虐，美国、墨西哥、台湾、日本、加拿大、多米尼加共和国、哥伦比亚、秘鲁、韩国、乌克兰等国家和地区也相继暴发猪流行性腹泻疫情[7-8]，给各国养猪业带来严重损失，是近年来全球养猪业关注的疫病焦点。笔者对猪流行性腹泻病毒的检测方法（包括病毒的分离鉴定、免疫电镜法、免疫学检测、分子生物学检测等）进行了综述，以期对猪流行性腹泻病毒的防控提供理论依据。

1病毒分离与鉴定

PEDV屬于冠状病毒科冠状病毒属成员，核酸基因组为单股正链RNA囊膜病毒[7]。1982年，宣华等[5]以吉林分离毒株在胎猪肠组织原代单层细胞培养物中分离PEDV获得成功。1988年，瑞典学者Hofmann等[8]成功在Vero细胞中培养PEDV，并发现在培养基中加入胰酶有利于PEDV在Vero细胞的增殖。孙莹[9]从江苏省某大规模猪场感染PEDV的哺乳仔猪小肠内容物样品中分离到JSX2014毒株，接种Vero细胞产生的CPE病变明显，但此病变特征与PEDV经典株CV777在细胞上产生的大空泡、细胞融合及多核细胞等病变特征不一致。此毒株的第55代已达到TCID50为10-4.71/mL，与2010年底以来国内PEDV分离株的亲缘关系较近，与经典毒株CV777等的亲缘关系较远，为新型G2b型变异株。卓秀萍[10]利用Vero细胞分离出EM-P株，属于G1-1亚型，与CV777株、韩国、日本、泰国等其他国家的流行毒株及2010年前的中国毒株处于同一亚群，经测定病毒的TCID50为10-5.5/mL。利用Vero细胞培养并加入一定浓度的胰酶分离PEDV毒株已成为使用最多的方法，添加胰酶的浓度从2.5 μg/mL到60 μg/mL不等。潘溪[11]用未添加胰酶的维持液成功分离出一株SH6变异毒株，证实在培养PEDV的Vero细胞中可以不添加胰酶。Shirato等[12]研究表明，没有胰酶，PEDV可以在Vero细胞上增殖，但病毒释放入培养液被强烈抑制。培养PEDV的细胞除了最常用的Vero细胞外，还有PK、CPK、MA104、PK-15、ESX等[13]，其中常用的是PK-15细胞。