摘要：本试验以狗肝菜为原料，研究了乙醇浓度、料液比、超声波提取时间及超声波提取温度对狗肝菜中总有机酸提取量的影响规律，采用酸碱滴定法对其含量进行测定，最终确定狗肝菜中总有机酸的最佳提取工艺。
关键词：狗肝菜;有机酸;酸碱滴定;正交实验
中图分类号：G633.91 文献标识码：B文章编号：1672-1578（2019）33-0190-01
1.材料与方法
1.1 实验材料。
仪器 KQ3200B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）;烘箱（上海福玛实验设备有限公司）;电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司）;密封型摇摆式中药粉碎机（无锡市江成液压机械公司）
试剂 无水碳酸钠基准试剂（天津市化学试剂批发公司）;邻苯二甲酸氢钾（天津市光复科技发展有限公司）;氢氧化钠（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）;盐酸（分析纯，广东省精细化学品工程技术研究开发中心）;酚酞（成都市科龙化工试剂厂）;溴甲酚绿 （成都市科龙化工试剂厂）;甲基红（成都市科龙化工试剂厂）;甲基橙（广州化学试剂厂）;95%乙醇（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）
样品 狗肝菜，购自崇左菜市场
1.2 实验方法。
采用单因素实验、正交实验，探究乙醇浓度、料液比、超声波提取时间及温度对狗肝菜中总有机酸提取量的影响规律，利用酸碱滴定法对其总有机酸的含量进行测定，最终确定最佳提取条件。
工艺流程：采集狗肝菜→清洗→烘干→粉碎→乙醇浸润→超声波振荡→总有机酸含量测定
2.结果与分析
2.1 单因素实验。
2.1.1 不同乙醇浓度对提取效果的影响。
准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取温度65℃、超声提取时间30min、料液比﹝狗肝菜叶粉末（g）：乙醇（ml）﹞1：30的条件下，分别在乙醇浓度55%，65%，75%，85%，95%条件下提取，比较不同乙醇浓度对提取物中总有机酸含量的影响，乙醇浓度小于75%之时，有机酸含量随着乙醇浓度的增大而增加，但超过75%时，总酸含量反而下降。这可能是因为乙醇浓度过小时，不利于有机酸的浸出;浓度过大时，引起产物结构的变化。因此提取有机酸乙醇的浓度为75%时为最优。
2.1.2 不同料液比对提取效果的影响。
准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取温度为65℃、超声提取时间为30min，乙醇浓度为85%的条件下，分别于液料比为1：10，1：20，1：30，1：40，1：50的条件下提取，比较不同料液比对提取物中总有机酸含量的影响，当料液比小于1：30时，有机酸提取率随着料液比的增加而增加;当料液比大于1：30时，有机酸提取率反而下降。这可能是因为料液比过小时，浸提液太小，从而影响有机酸提取;若加水过多，不利于后浓缩，因此提取有机酸料液比为1：30时为最优。
2.1.3 不同提取时间对提取效果的影响。
准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取温度65℃、料液比﹝狗肝菜叶粉末（g）：乙醇（ml）﹞1：30，乙醇浓度为85%的条件下，分别超声提取20min，30min，40min，50min，60min，比较不同超声提取时间对提取物中总有机酸含量的影响，随着时间的延长，有机酸提取率先上升后下降。说明有机酸浸出过程与时间密切相关，时间过短，有机酸浸出不充分，但时间过长，可能影响产物结构的变化，从而使提取率降低。因此提取有机酸超声提取时间为35min时为最优。
2.1.4 不同提取温度对提取效果的影响。
准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取时间30min、料液比﹝狗肝菜叶粉末（g）：乙醇（ml）﹞1：30，乙醇浓度为85%的条件下，分别在超声提取温度55℃，60℃，65℃，70℃，75℃条件下提取，比较不同超声提取温度对提取物中总有机酸含量的影响，当提取温度小于70℃时，随着温度的升高，狗肝菜有机酸提取率随之增大;当温度继续升高，有机酸提取率呈下降趋势。说明温度升高有利于有机酸的浸出，但温度过高会影响有机酸的稳定性。因此提取有机酸超声提取温度为65℃时为最优。
2.2 验证性实验。
精密称取狗肝菜叶粉末1.0000g3份，在最佳组合条件，即乙醇浓度75%，料液比1：30，提取时间35min，提取温度65℃的条件下，按拟定方法进行提取，测定，计算含量。在此最佳参数组合条件下，有机酸含量的平均值为7.03%，提取率大于正交试验表中的任何一组，为最佳选择。
2.3 精密度实验。
精密称取狗肝菜叶粉末1.0000g，在最佳组合条件，即乙醇浓度75%，料液比1：30，提取时间35min，提取温度65℃的条件下，按拟定方法进行提取，平行测定5次，计算含量。相对标准偏差RSD为1.02%，表明该工艺提取方法测定总酸含量精密度良好。
2.4 稳定性实验。
精密称取狗肝菜叶粉末1.0000g，在最佳组合条件，即乙醇浓度75%，料液比1：30，超聲时间35min，超声温度65℃的条件下，按拟定方法进行提取，分别于0h，2h，4h，6h，8h，12h进行含量测定，计算含量。相对标准偏差RSD为1.35%，表明该工艺提取方法测定总酸含量在12h内是稳定的。
3.讨论
虽然中草药中有机酸类成分的提取分离及测定方法有很多，但其适用范围条件各有所差异。要选择出一种适合的提取分离和分析测定方法，除了要考虑所需要分析的有机酸类成分的结构组成和性质外，还需要充分考虑提取物中其它物质成分可能对有机酸造成的干扰。因此，在实际应用中要根据具体情况做具体分析，综合各因素考虑，以确定出最佳的提取分离及测定方法。
参考文献：
[1]陈显双.狗肝菜及其栽培技术[J].广西热带农业，2005（1）：41.
[2]李南薇，范媛媛，陆映机.狗肝菜多糖提取工艺研究[J].广东农业科学，2011（11）：116-117.
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