【摘 要】目的：研究姜黄素在急性梗阻性化脓性胆管炎大鼠肝组织的作用，探讨姜黄素的调节作用及机制。方法：制作大鼠AOSC模型，姜黄素组为阳性对照，比较肝功能血清学指标，采用RT-PCR法检测IL-17mRNA的表达情况。结果：AOSC组肝组织外周血ALT、AST指标明显高于姜黄素干预组（p<0.05）； RT-PCR结果提示AOSC组肝组织、姜黄素干预组IL-17mRNA的光密度比值为1.79士0.21、0.78士0.18。结论：1、姜黄素对AOSC并发肝组织损伤可能有保护改善作用；2、织中存在着IL-18mRNA 的过度表达，并与肝部病变的严重程度呈正相关，提示IL-18在 AOSC并发肝损伤发生、发展的过程中发挥着重要的作用。
【关键词】姜黄素；急性梗阻性化脓性胆管炎；白细胞介素17，肝组织
【中图分类号】R285 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）07-0053-01
急性梗阻性化脓性胆管炎（AOSC）是肝胆外科常见疾病，死亡率较高。肝脏具有重要的物质代谢功能和免疫防御能力1但是肝脏却易受细菌、毒素攻击。本实验通过建立AOSC动物模型，利用RT-PCR等方法，从分子生物学角度等不同层面探讨了IL-17在肝组织中的表达意义。
1 资料和方法
1.1 资料 选用60只雄性清洁级大鼠，体重200-350g,标准颗粒混合饲料喂养。大鼠随机分为2组:②AOSC模型组(n=30); ①姜黄素干预组 (n=30);两组小鼠在禁食不禁水12小时后，用2%戊巴比妥钠肌肉麻醉然后做如下处理:
建立AOSC模型组:无菌条件下进入腹腔后，钝性游离胆总管，在胆总管远端结扎，近端插入硅胶管，插入深度6-1Omm，见黄色胆汁流出后，向管内缓慢注入菌液0.2ml半分钟内完成，然后将硅胶管拔除，结扎近端胆总管，关闭腹腔，分别于ACST后2、6、12、24h活杀动物。
1.2 实验设备
PCR实验所需仪器有德国夏利士1650 NM离心机、PCR扩增仪PE9700、Trizol试剂由INVITROGEN公司提供、Trkara RT-PCR试剂盒购自大连生物工程公司。
1.3实验方法
1.3.1 RT-PCR实验
1.3.1.1总RNA提取：取标本集中复溶。用淋巴细胞分离液分离有核细胞，置
1.5ml管中，离心去上清，加入Trizol 1500ul混匀至室温10min，加入氯仿100ul混匀，4℃10000rpm 10min，加入75%乙醇洗涤, 12 000 r/min, 5 min, 4 ℃离心; 收集管内的溶液为RNA样品，紫外分光光度计测定组织标本260nm/280nm光密度值及其浓度，所有样品的光密度比值均>1.8。
1.3.1.2RT-PCR反应
按照逆转录试剂盒说明书将组织及细胞的总RNA逆转录成cDNA, 以β-actin为内参照行PCR反应。RT-PCR扩增引物序列如下：引物序列如下：扩增引物为：目的基因IL-18mRNA: 5’ tcagcacagtacgacg3’（上游引物）；5’cgctgagattgtacagc3’（下游引物），β-actin: 5’ gaaggtgatcggat3’（上游引物）; 5’ gaagattgatgg3’（下游引物）;反应条件：95 ℃ 2 min，94 ℃ 15 s，58 ℃ 30 s ，72 ℃ 1.5 min 30个循环，72 ℃ 10 min。产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测。
2 统计学方法
应用SPSS 16.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用单因素方差分析，计数资料的比较采用χ2检验。P<0.05认为差异有统计学意义。
3 实验结果
3.1 肝组织中IL-17 mRNA表达情况
IL-17 mRNA在不同组大鼠肝脏组织中均有表达，AOSC组、姜黄素干预组IL-17 mRNA表达量的相对比值的均值1.79士0.21、0.78士0.18。两者表达明显差异性（p<0.05）,（见图1后）。
3.2 肝组织血清学指标变化情况
姜黄素组不同时间段血清ALT、AST表达显著低于AOSC组，比较有统计学差异（p<0.05）,（具体情况如表2，见后）
4 讨论
急性梗阻性化脓性胆管炎（AOSC）是急性胆管完全梗阻和化脓性感染所致，起病急、并发症多，死亡率极高2。而肝脏是最易累及的组织，因此临床上手术治疗AOSC虽然是根本措施，但是提前预防和治疗肝损伤也是相当必要的3。
有研究报道，姜黄素抗炎作用，抑制癌细胞的生长，具有多种生物活性，且毒副作用小4。通过本实验对照研究姜黄素干预组大鼠肝功能ALT、AST血清指标明显低于AOSC组，提示姜黄素可能具有保护肝脏功能的作用，其发生机制1、姜黄素促进胆囊对LDL排泄，抑制脾脏对LDL的摄取，使血中LDL和脂蛋白的含量降低，从而起到降血脂作用，起到改善肝功能作用；2、姜黄素能够增加小鼠巨噬细胞的吞噬功能，加强免疫调节作用，从而有效的改善肝功能5。
IL-17作为一个同型二聚体，可被非糖基化和N端糖基化。IL-17的主要功能是介导炎症反应，它是前炎症细胞因子，是炎症反应的微调因子,具有多种功能和多个作用目标6。研究结果表明， IL-17mRNA在AOSC组大鼠肝组织的含量显著高于姜黄素干预组，比较差异性具有统计学意义，结合肝功能指标ALT、AST血清含量的比较，初步证实姜黄素可以保护肝脏功能。
AOSC关于IL-17表达上调介导肝功能损害的详细机制目前尚不清楚，作为能广泛参与炎症过程中组织、器官损害及细胞免疫功能降低等多种病理过程的细胞因子7与内毒素介导的肺损伤有密切相关。IL-17在II型免疫应答(Th2型应答)中发挥着关键作用，其诱导产生INF-Y的能力强于Th2，也可增强NK细胞及T细胞介导的毒性作用。有研究表明，IL-17还可能通过以下途径促进炎症的发生：IL-17诱导包括血管内皮生长因子在内的大量的促血管生成因子的表达，还可以诱导IL-6和PGE2的生成并增强ICAM-1的表达，这些分子均在血管生成和肿瘤侵袭中起主要作用8。
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