桦剥管菌产木聚糖酶酶学性质研究

【摘要】本文测定了桦剥管菌（Piptoporus betulinus）在白桦木屑培养基中产木聚糖酶粗酶的部分酶学性质，测定结果为木聚糖酶最适反应温度为50℃，最适反pH值应为5.0。

【关键词】桦剥管菌；木聚糖酶；酶学性质

本文研究了桦剥管菌分泌木聚糖酶的部分酶学性质，希望能为木材腐朽菌降解半纤维素的机制研究提供有用数据。

1.材料与方法

1.1材料

桦剥管菌（P. betulinus），为非褶菌目多孔菌科剥管菌属。

1.2主要试剂

榉木聚糖、D-木糖、3，5-二硝基水杨酸（DNS）。

1.3实验方法

（1）D-甘露糖标准曲线的绘制。pH 5.0 的NaAC-HAC缓冲液中，用紫外分光光度计在波长540nm处，测D-木糖含量，绘制标准曲线如图1所示。

（2）粗酶液酶活测量方法。在无菌操作条件下，将木屑培养基中桦剥管菌菌丝接种到PDA培养基平板上，培养7-10d；在培养基上钻取2个相同大小菌饼，产酶固体培养基中，23℃培养数天，测定酶活前取出菌饼；向培养中加入5倍质量的蒸馏水，浸泡12h后过滤，滤液于4000 rpm离心10 min，上清液用于木聚糖酶酶活性测定。配制的6.67‰榉木聚糖溶液为底物，pH 5.0 的NaAC-HAC缓冲液中，以DNS为显色剂，用1cm比色皿在分光光度计540nn 处测木聚糖酶降解前后吸光度变化。用已绘制D-木糖标准曲线，计算反应液中粗酶液木聚糖酶的活力。（3）酶学性质测定。在pH 3.0-9.0不同缓冲液条件下，测定木聚糖酶反应最适pH。在4℃条件下，将粗酶液分别于pH 3.0-9.0不同缓冲液中放置1h和24h，测定木聚糖酶酶活，探究pH对酶活稳定性的影响。最适pH条件下，分别测定30℃-90℃不同反应温度时酶活，确定酶反应最适温度。将粗酶液在30℃-90℃不同温度下分别保温1h和24h，在最适pH条件下测定酶活，探究温度对酶活稳定性的影响。

2.结果与分析

2.1酶反应最适pH及pH稳定性

用产酶固体培养基，在人工气候箱中23℃培养桦剥管菌，取第18d菌样，以6.77‰榉木聚糖为底物，检测酶反应最适pH及pH稳定性，结果如图2，pH 4.5-6.0之间酶活力较高，相对酶活大于75%，其最适pH为5.0。在4℃条件下不同pH值缓冲液中，将粗酶液放置1h和24h后测定木聚糖酶残存酶活力，结果如图3，酶pH稳定范围在5.0-6.5之间；粗酶液在此pH范围内放置1h，相对酶活均能保持在80%以上；放置24h后相对酶活均能保持在60%以上，结果说明桦剥管菌木聚糖酶pH稳定性较好。

2.2酶反应最适温度及热稳定性

不同温度下酶活结果如图4所示，50℃时达到最大值酶活。当温度继续升高酶活逐渐下降，在45～65℃之间，桦剥管菌木聚糖酶酶相对较高，温度升到80℃时相对酶活降至20%。不同温浴中放置1h和24h，酶活变化结果如图5。在低于50℃的水浴保温1h后，60℃时残存酶活仍在90%，在低于60℃的水浴保温24h后，测得酶相对活性不低于60%，桦剥管菌木聚糖酶热稳定性较好。

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