【中图分类号】R155.3 【文献标识码】B 【文章编号】1672-3783（2018）07-03--01
2017年10月2日，成都市某区062小区一住户举办了32桌酒席的坝坝宴，12时共有约320人就餐，15时开始，就餐人员中陆续有8人出现腹痛、恶心、呕吐、腹泻等症状，先后至区中医院、区一医院就诊。根据现场流行病学调查和食品卫生学调查结果，采集了8名患者的肛拭子样品8份和坝坝筵午餐留样食品7份做实验室检查，检验项目为金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌和霍乱弧菌。结果从3份肛拭子，7份留样食物检出了金黄色葡萄球菌。
1 材料和方法
1.1 样品来源 坝坝宴就餐后发病住院患者的大便标本，以肛拭子采集；卤鸭子、卤肚条、卤兔头、卤鸭头、卤鸡胗、凉拌鸡、干炸鸭子等剩余食物。按照食品安全国家标准《食物中毒诊断标准及处理技术准则》（GB 14938-94）进行样本采集和运送。
1.2 方法 按照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏检验》（GB 4789.4-2010）；《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（GB 4789.4-2010）；《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏检验》（GB 4789.5-2012）；《食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血弧菌检验》（GB 4789.7-2013）； 《沙门氏菌食物中毒诊断标准及处理原则》WS/T 13-1996； 《葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则》WS/T 80-1996； 《副溶血弧菌食物中毒诊断标准及处理原则》WS/T 81-1996；《霍乱防治手册》第六版进行检测和分析
1.3 材料 增菌液、培养基、革兰氏染色液、生化实验试剂均由北京陆桥试剂有限责任公司提供，弧氏显色培养基由青岛海博公司提供，霍乱弧菌O1/O139型诊断血清由宁波天润公司提供，均在有效期内。
1.4 前增菌 将检样接种于缓冲蛋白胨水增菌24h，用于检测沙门氏菌。
1.5 增菌培养 将检样分别接种于用7.5%氯化钠肉汤、10%胰酪胨大豆肉汤、3%氯化钠碱性蛋白胨水、碱性蛋白胨水、志贺氏菌增菌肉汤；前增菌后的缓冲蛋白胨水接种于TTB培养基和SC 培养基进行沙门氏菌增菌。
1.6 分离培养 增菌后，7.5%氯化钠肉汤、10%胰酪胨大豆肉汤增菌后接种于血平板和Baird-parker平板上分离培养金黄色葡萄球菌；3%氯化钠碱性蛋白胨水增菌液接种于TCBS琼脂平板和弧菌显色培养基；碱性蛋白胨水增菌液接种于4号琼脂平板和TCBS琼脂平板、志贺氏菌增菌肉汤检样接种于XLD和麦康凯平板；TTB培养管和SC 培养管接种于BS琼脂平板和HE琼脂平板。以上分离培养的项目分别是金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、志贺氏菌和沙门氏菌。
1.7 初筛实验 经分离培养后，挑取可疑菌落进行革兰氏染色、显微镜观察，对镜检阳性的样本进行纯培养鉴定和初步生化试验。
1.8 鉴定实验 对初步生化试验阳性者进行血浆凝固酶实验和免疫学验证。
2 结果
2.1 菌落形态 3份肛拭子、7份剩余食物（卤鸭子、卤肚条、卤兔头、卤鸭头、卤鸡胗、凉拌鸡、干炸鸭子）在7.5%氯化钠肉汤和10%胰酪胨大豆肉汤呈浑浊生长，血平板上形成较大、圆形、光滑突起、湿润、金黄色（有时呈白色）的菌落；Baird-parker平板上形成颜色灰色到黑色、边缘略淡，周围有浑浊带，外层一透明圈的菌落。其他分离培养平板均未见可疑菌落。
2.2 菌体形状 为革兰氏染色阳性球菌，镜检菌落排列呈葡萄球状，无芽孢无荚膜，直径约为0.5mm～1mm，符合金黄色葡萄球菌的典型特征。
2.3 血浆凝固酶实验 挑取疑似菌落进行血浆凝固酶实验，10株菌株BHI肉汤培养后呈现凝固，营养琼脂斜面培养后形成表面光滑湿润、浅黄色的小斑点状菌落。十株菌株血浆凝固酶实验结果呈阳性。
2.4 PCR方法验证 采用实时荧光定量PCR检测方法对血浆凝固酶实验结果阳性菌株进行定性验证，结果为阳性。
3 分析讨论
按照《食物中毒诊断标准及技术处理总则》（GB 14938-1994）和《葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则》（WS/T 80-1996），根据本次事故的临床表现、流行病学特点和实验室检验结果，综合研判本次事故为一起由金黄色葡萄球菌引发疑似食物中毒事故。本次食物中毒实验室检测，对检测样进行了增菌培养、分离培养、纯培养、初筛实验、生化试验、血浆凝固酶实验鉴定。分离的10株菌株为革兰氏染色阳性，葡萄球状排列，无芽胞无荚膜，血浆凝固酶实验阳性。因此确定引起本次食物中毒是金黄色葡萄球菌污染食品所致。
金黄色葡萄球菌广泛存在于自然界，是人类和其他动物表面的正常菌群，可以通过多种方式进入人体，当黏膜受损或免疫力下降时，会感染致病，例如化脓性炎症、蜂窝组织炎、败血症、脓毒血症等。经金黄色葡萄球菌污染食品可导致食物中毒。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的致病原因主要是此菌在食物中大量繁殖并产生外毒素、生物酶所致。这些致病因素可引起体内一系列的反应，刺激大脑中枢，产生呕吐、腹泻、腹痛的症状。金黄色葡萄球菌容易污染的食品有乳制品、糕点、熟肉制品等，尤其是即食类食品污染风险较高[1-2]，而果蔬、水产品等较低。我国细菌性食物中毒的主要致病菌是沙门氏菌和副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌，其中金黄色葡萄球菌引起的比例是20%～25%，排第三位。目前这一现象已引起国家检验检疫和进出口部门的高度重视，也是世界性的公共卫生问题。如何预防和快速处置此类问题是亟待解决的难题。除了加大市场监管力度、加强居民宣传教育之外，提高实验室检测能力和效率，也是关键的环节。
细菌性食物中毒的实验室检测通常通过检测病原菌或者致病毒素来确定，常见的方法有细菌学培养法、免疫学方法、分子生物学方法、质谱分析法和生物传感法。本次处置方式所采用的细菌培养法是传统工作中最常采用的方法，简单易行但是操作繁琐耗时；免疫学方法灵敏度高但是特异性低，容易出现假阳性，并且成本昂贵；分子生物学方法包括PCR方法和实时荧光定量PCR方法，尤其后者，检测限低、检测周期短、避免面交叉污染，已经在此类检测领域得到广泛应用；质谱分析法和生物传感法快速、特异、灵敏、可定量的优点，但是对仪器和操作技术有较高的要求，不适合普通基层实验室广泛应用[3-5]。综上所述，传统细菌学培养法结合PCR技术检测是目前较适合基层实验室所采用的方法。不过也建议，在疾控系统标准化建设的过程中，可加大投入，配置先进的实验设备，加强技术人员专业培训，进一步提高实验室的检测水平，综合提高疾控系统的突发公共卫生事件应急处置能力。
参考文献
梁 浩，王 舟，谭 唯，等，深圳市2001-2005 年食物中毒情况分析及防制对策[J].实用预防医学，2008，14：5.
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王燕梅，乔昕，袁宝君，等.2008 年江苏省食源性致病菌监测分析[J].中国卫生检验杂志，2010，20（8）.
吕素玲，诸葛石养，韦程媛，等.广西食品中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药情况分析[J].应用预防医学，2012，18（2）.
向紅，周藜，廖春，等.邵金黄色葡萄球菌及其引起的食物中毒的研究进展[J].中国食品卫生杂志，2015，27：2.
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