材料研磨成粉末备用，每个样品在成分含量测定时做5个重复。
1.2 含水量和醇溶性浸出物含量测定 水分和醇溶性浸出物的含量分别参照《中国药典》2010年版（一部）附录IX H水分测定法（烘干法）和《中国药典》2010年版（一部）附录X A醇溶性浸出物测定法项下的热侵法进行测定[17]。
1.3 总皂苷含量测定 每个样品称取粉末1.0 g，加15 mL 70%乙醇提取3次，每次1.5 h。合并滤液挥干溶剂，用水定容至10 mL，用20 mL石油醚脱脂，再用正丁醇萃取。挥干萃取液的溶剂用50%乙醇定容至50 mL备用。
称取齐墩果酸对照品1.8 mg，用甲醇溶解并稀释至25 mL，作为对照品溶液。量取该对照品溶液1.2，1.4，1.5，1.6，1.8，2.0 mL水浴挥干甲醇，加入新配5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL和高氯酸1.0 mL，60 ℃水浴15 min。冷却至室温后加冰醋酸10 mL，摇匀。以相同试剂作空白对照，于548 nm处测定吸光度，以含量为X轴，吸光度为Y轴，绘制标准曲线。
取样品溶液0.6 mL，按标准曲线制备项下方法进行测定，对照标准曲线计算出样品的总皂苷含量。
1.4 总多糖测定 每个样品称取粉末1.0 g，加30 mL蒸馏水提取2次，每次2 h。过滤后合并滤液并定容至100 mL。取5.0 mL上述滤液，加入20 mL无水乙醇，混匀5 min，3 000 r·min-1离心5 min。残渣用80%乙醇洗涤5次，用蒸馏水溶解并定容至50 mL备用。
称取葡萄糖对照品3.0 mg，用甲醇溶解并稀释至25 mL，作为对照品溶液。以葡萄糖标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分别加蒸馏水至1.0 mL。加入5%苯酚溶液0.5 mL，混匀，加入5 mL浓硫酸，再混匀，沸水浴2 min。冷却后用紫外分光光度计在485 nm处测吸光度，以含量为X轴，吸光度为Y轴，绘制标准曲线。
取样品液0.4 mL，加入0.6 mL蒸馏水，按标准曲线制备项下方法进行测定，对照标准曲线计算出样品的总多糖含量。
1.5 数据处理和分析 使用SPSS 19.0软件对所得数据进行整理后做相关性和方差分析并绘制回归曲线，使用SigmaPlot 12绘图。数据作参数统计分析前，检验正态性（Kolmogorov-Smirnov test）和方差同质性（F-max test）。个体质量与醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量的相关性用Pearson显著性分析。单因子方差（One-Way ANOVA）分析不同产地、不同年份和不同季节醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量的差异，以及夏季叶、茎、根和块茎的醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量的差异。显著性水平设置为α=0.05。
2 结果
2.1 各成分含量及不同产地含量差异 浙江雪胆块茎平均含水量为8.32%，醇溶性浸出物平均质量分数为26.17%，总皂苷平均质量分数为0.91%，总多糖平均质量分数为16.89%。根、茎、叶和块茎的醇溶性浸出物含量（P<0.01）和总皂苷含量（P<0.01）差异极显著。除块茎外其他营养器官均未测出多糖含量，见表2。
叶片醇溶性浸出物含量较高，但低于块茎，而茎和根均远低于块茎。叶片和茎的总皂苷含量均显著低于块茎。因此浙江雪胆块茎是最理想的有效药用部位，也是传统的药用部位。叶片醇溶性浸出物质量分数为25.51%，总皂苷质量分数为0.50%，表明夏季的叶片也具一定的应用价值。
不同产地的浙江雪胆醇溶性浸出物含量（P<0.01）、总皂苷含量（P<0.01）和总多糖含量（P<0.01）有极显著差异，见图1。
a.龙游；b.左溪；c.乌岩岭；d.武功山
图1 龙游、左溪、乌岩岭和武功山各成分含量
Fig.1 The component content of Longyou， Zuoxi， Wuyanlin and Wugongshan
龙游、左溪、乌岩岭和武功山的醇溶性浸出物的含量表现为龙游<左溪<乌岩岭<武功山，且各个分布地间均有显著差异。总皂苷平均质量分数分别为龙游0.68%、左溪0.71%、乌岩岭0.94%和武功山0.91%，乌岩岭和武功山的样品显著高于龙游和左溪。总多糖含量显示乌岩岭>左溪>龙游>武功山，乌岩岭的样品显著高于其他产地的样品。
2.2 成分含量的年季变化 春、夏、秋、冬4季浙江雪胆块茎的醇溶性浸出物含量（P<0.01）、总皂苷含量（P<0.01）和总多糖含量（P<0.01）差异均极显著，见图2。
不同小写字母差异显著，P<0.05（图3同）。
图2 成分含量季节性变化
Fig.2 Seasonal changes of the component contents
浙江雪胆的块茎内醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖均具有明显的季节变化。醇溶性浸出物春、夏、秋、冬4个季度平均质量分数分别为25.89%，26.45%，28.60%，26.83%。浙江雪胆块茎总皂苷含量春、夏、秋、冬4个季度平均质量分数分别为0.62%，0.94%，1.40%，0.61%。浙江雪胆块茎总多糖含量春、夏、秋、冬4个季度平均质量分数分别为20.22%，9.70%，38.58%，21.78%。醇溶性浸出物和总皂苷的含量表现为春、夏、秋3季逐渐升高，到冬季下降。总多糖含量在夏季出现下降，但在秋季迅速升高至最大。因此浙江雪胆块茎的醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量，秋季都是4个季度中最高的。
2012，2013年醇溶性浸出物平均质量分数分别为27.08%，25.09%，醇溶性浸出物含量在2012，2013年之间无显著差异。总皂苷质量分数在2012，2013年分别为1.28%，1.44%，总皂苷含量无显著差异。总多糖质量分数则分别为38.58%，9.70%，不同年份间总多糖含量（P<0.01）差异极显著，见图3。
图3 2012年和2013年秋季各成分含量
Fig.3 The component content of the autumn of 2012 and 2013
2.3 块茎个体质量与成分含量关系 以乌岩岭秋季块茎样品做相关性分析，结果表明浙江雪胆不同个体质量的块茎的醇溶性浸出物含量和总多糖含量无显著差异，但总皂苷含量（P<0.01）与块茎个体质量极显著相关。个体质量和总皂苷含量进行曲线估计得回归方程Y=0.972+0.000 3X+2.525×10-6X2，R2=0.933。浙江雪胆块茎总皂苷含量在个体生长过程中随块茎质量增长先增后减，在质量为594.06 g时，质量分数达最大值1.863%。
3 讨论
3.1 浙江雪胆有效成分含量高，具有开发前景 与其他雪胆属植物一样，浙江雪胆有效成分含量高。本研究表明浙江雪胆秋季醇溶性浸出物平均质量分数达26.17%，产自四川雅安等地的雪胆原药料醇溶性浸出物的质量分数为22.02%[18]，浙江雪胆醇溶性浸出物含量高于雪胆原药料。研究显示浙江雪胆在秋季皂苷类物质平均含量高达1.40%，马铜铃H. graciliflora[19]和中华雪胆H. chinensis [20]含有双氢葫芦素F和3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-齐墩果酸等多种皂苷类物质，需进一步研究浙江雪胆皂苷类物质的化学成分。并且浙江雪胆秋季总多糖平均质量分数高达38.58%，块茎在自然风干后8.32%的平均含水量也非常有利其作为原药料保存和使用，因此浙江雪胆是具有很好开发前景的药用植物。
3.2 不同产地、生长期和生物量有效成分积累量的差异可指导种植 目前浙江雪胆数量少，分布区域窄，且野生种群萎缩[21]，这严重制约浙江雪胆的开发利用。只有通过广泛推广种植，提高浙江雪胆原药料的供应量，才能使浙江雪胆这一重要药用资源既得到有效保护，也能充分开发利用。浙江雪胆有效成分含量会因为产地的不同而差异显著。文献报导产自金佛山的彭县雪胆H. pengxianensis，葫芦素F含量较高，而产自彭县的则全然不含葫芦素[11]，表明葫芦素F在彭县雪胆不同产地的药材中有差异。本研究结果表明浙江雪胆块茎醇溶性浸出物含量、总皂苷含量和总多糖含量在不同产地之间也存在显著差异，乌岩岭产的总皂苷和总多糖含量最高，醇溶性浸出物含量虽略低于武功山的，统计分析并无显著差异。可见，乌岩岭种群药用价值最高，可进一步研究其有效成分含量高的原因，用于种植生产。此外，本实验测试了浙江雪胆所有样品，均未测得雪胆甲素和雪胆乙素，而沈晓婷等[14]的研究结果表明浙江雪胆的雪胆甲素含量较高，其原因尚需进一步研究。
2012，2013年不同年份浙江雪胆块茎的醇溶性浸出物含量和总皂苷含量无显著差异，稳定的活性成分含量能很好保证其不同年份间种植的药材质量，但总多糖含量差异大。粟君等研究表明温度对青钱柳Cyclocarya paliurus根多糖类物质的含量影响极显著[22]，而浙江雪胆块茎总多糖含量显著下降也可能受2013年华东地区异常的高温天气的影响。这就要求种植时一定要避免高温干燥，特别在夏季要保证种植环境足够湿润、荫蔽[23]。
浙江雪胆块茎所含活性成分秋季最高与以往的的研究结果一致[20，24]，这是因为浙江雪胆进入秋季以后地上部分会枯死，宿存的块茎在秋季会积累营养成分，为过冬及春季萌芽所用，因此秋季浙江雪胆地上部分枯死后采收能发挥其最大药效[24]。聂瑞麟等[23]认为曲莲H. amabilis在种植4～5年后采收最佳，本研究的结果进一步说明浙江雪胆块茎个体质量达近600g采收最佳，这为种植时的采收时间提供了理论依据。
3.3 可开发利用的其他药用部位 块茎较根、茎、叶具最佳药用价值，与传统药用部位一致。本研究表明叶片总多糖和总皂苷的含量较高，可见其也有一定的药用价值，正如雪胆属的马铜铃H. graciliflora以果实入药[25]，因此可进一步研究如何利用浙江雪胆叶片有效成分及分布规律，以确保珍贵药用资源能得到充分的开发利用。
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