[摘要] 目的 评价冷凝集试验和酶联免疫吸附试验对诊断呼吸道肺炎支原体IgM抗体感染的临床价值。 方法 收集我院呼吸内科2012年12月～2013年10月共计100份诊断为呼吸道肺炎支原体感染患者的痰液标本。比较①酶联免疫吸附试验与冷凝集试验的真阳性、假阳性、真阴性及假阴性。②酶联免疫吸附试验与冷凝集试验敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比。 结果 酶联免疫吸附试验的真阳性、假阳性、真阴性及假阴性分别为95%、3%、97%、5%，冷凝集试验的真阳性、假阳性、真阴性及假阴性分别为43%、39%、61%、57%，差异有统计学意义（P<0.05）。 酶联免疫吸附试验和冷凝集试验敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比分别为95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%及43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 本研究认为酶联免疫吸附试验对呼吸道肺炎支原体IgM抗体敏感性、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比均明显高于冷凝集试验。
[关键词] 冷凝集试验；酶联免疫吸附试验；呼吸道肺炎支原体；IgM抗体
[中图分类号] R446.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）04-0107-03
[Abstract] Objective To evaluate the clinical value of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay in the diagnosis of respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody infection. Methods A total of 100 sputum samples of the patients diagnosed with respiratory tract mycoplasma pneumoniae infection in the respiratory medicine department of our hospital were collected. ①The true positive，false positive，true negative and false negative rates of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. ②The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value， positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. Results The true positive，false positive，true negative and false negative rates of enzyme-linked immunosorbent assay were 95%， 3%， 97% and 5% respectively and those of the cold agglutination test were 43%， 39%， 61% and 57% respectively， with statistically significant differences （P<0.05）. The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value， positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of enzyme-linked immunosorbent assay and cold agglutination test were 95%， 97%， 96%， 96.9%， 95.1%， 31.7%， 0.05% and 43%， 61%， 52%， 52.4%， 51.7%， 1.1%， 0.93%， respectively， with statistically significant differences（P<0.05）. Conclusion This study suggests that enzyme-linked immunosorbent assay has obviously higher sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value and positive likelihood ratio to respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody than cold agglutination test.
[Key words] Cold agglutination test； Enzyme-linked immunosorbent assay； Respiratory tract mycoplasma pneumoniae； IgM antibody
支原体是一类介于细菌与病毒之间、无细胞壁的微生物，易受环境变化而破坏，有研究统计[1]在确诊的肺炎病例中，由肺炎支原体引起的肺炎占15%～20%，支原体通过飞沫传入呼吸道，粘附上皮细胞表面神经氨酸受体上，但支原体还可通过血行感染全身任何器官组织。支原体好发于晚秋，但无明显的季节性[2]。人群对支原体普遍易感，学龄儿童由于呼吸系统发育不全，非常容易感染支原体，但近几年疾病谱变化，成人感染支原体的比例逐步增高，因此，快速检测支原体对临床诊断有重要意义[3]。目前支原体感染的常用实验室检查手段为冷凝集试验、酶联免疫吸附试验、PCR技术。但是由于PCR技术设备昂贵，且需要专业的技术人才，因此PCR法在临床中使用较少，均可呈阳性反应，对治疗无指导意义。因此本研究的目的为评价冷凝集试验和酶联免疫吸附试验对诊断呼吸道肺炎支原体IgM抗体感染的临床价值。
1 资料与方法
1.1 病例选择
收集我院呼吸内科2012年12月～2013年10月共计100份诊断为呼吸道肺炎支原体感染患者的痰液标本，肺炎支原体感染患者中男57例和女43例，年龄17～67岁，平均（39.8±25.7）岁。所有研究对象均签定知情同意书、保密知情书，研究通过医院伦理道德委员会的批准、核实。
1.2 入选标准
①就诊时临床资料、治疗经过完整。②呼吸道支原体感染的诊断符合中华医学会呼吸内科学分会关于呼吸道支原体感染的诊断与鉴别诊断[4]。③每个研究对象能配合护理人员，自愿参与本次研究。
1.3 排除标准
①入院时生命体征不平稳的患者。②入院有严重肝肾功能不全、恶性肿瘤、自身免疫性疾病者，药物有过敏、恶性心律失常者。
1.4 冷凝集试验
在室温下，配人红细胞悬液（患者自身红细胞与5倍生理盐水进行配比），然后取试管10支，各加生理盐水0.1 mL，血清0.1 mL加第1管，混匀后吸出0.1 mL至第2管，按上述的配比方法一直加至第9管，第10管作对照；每管加入人红细胞悬液0.1 mL，在4℃的冰箱中放置1 h，阳性为出现红细胞凝集，若加入37℃水浴后凝集消失则判定真阳性。当滴度大于1∶32有参考意义。
1.5 酶联免疫吸附试验
采用福建三明博峰生物科技有限公司提供的肺炎支原体IgM抗体试剂盒，操作及结果判断按说明书进行。
1.6观察指标
真阳性、假阳性、真阴性及假阴性敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比。
1.7 评价指标
比较①酶联免疫吸附试验与冷凝集试验的真阳性、假阳性、真阴性及假阴性。②酶联免疫吸附试验与冷凝集试验敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比。
1.8 统计学方法
将资料录入SPSS18.0软件。所有计量资料符合正态分布，采用均数±标准差（x±s）描述，两组均数的比较使用t检验。计数资料采用频数描述，用χ2检验法。三组间比较采用ANOVA单因素方差分析，方差齐者用LSD法检验，方差不齐者用Games-Howenll法。多因素分析：将单因素分析中P<0.05的变量纳入Logistic回归分析，计算优势比及95%可信区间。P<0.05为差异有统计学意义。
3 讨论
肺炎支原体（M.Pneumonia）是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。肺炎支原体也是诱发哮喘的重要病原体，可引起肺外器官病变，如脑炎、血液病、关节炎或多器官功能衰竭。支原体肺炎的病理变化主要为急性气管-支气管炎和间质性肺炎，支气管黏膜有中性粒细胞浸润，肺泡内可含少量渗出液，肺泡壁和间隔中有中性粒细胞浸润[5-8]。肺炎支原体的致病首先通过其顶端结构粘附在宿主细胞表面，并伸出微管插入胞内吸取营养、损伤细胞膜，继而释放出核酸酶、过氧化氢等代谢产生引起细胞的溶解、上皮细胞的肿胀与坏死。诱发机体产生的抗体也可能参与了上述病理损伤。肺炎支原体感染后症状较轻，发病初期有乏力、咽痛、肌肉酸痛、恶心等，热度不一，2～3 d后出现明显的呼吸道症状，发热可持续2～3周，可有肺脓肿、支气管扩张、闭塞性细支气管炎，可闻及干性或湿性啰音。支原体肺炎可并发各种肺外并发症，如自身免疫性溶血性贫血、脑脊膜炎、心包炎、结节性红斑等皮肤黏膜损害。X线上肺部可表现斑点片状模糊影，可侵犯至多叶，伴肺门淋巴结肿大。MP感染呈散在发病，一年四季均可发病。研究指出肺炎支原体感染临床症状不明显，隐性感染较多，症状不典型，仅靠临床症状难以诊断[9]。因此，诊断须依据实验室检查。
本研究发现酶联免疫吸附试验的真阳性、假阳性、真阴性及假阴性分别为95%、3%、97%、5%，冷凝集试验的真阳性、假阳性、真阴性及假阴性分别为43%、39%、61%、57%，差异有统计学意义（P<0.05）。酶联免疫吸附试验敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比分别为95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%；冷凝集试验敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比分别为43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%，差异有统计学意义（P<0.05）。即本次研究认为酶联免疫吸附试验对呼吸道肺炎支原体IgM抗体敏感性、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比均明显高于冷凝集试验。
首先，我们考虑冷凝集试验虽然方法简单，但其敏感性和特异性差。研究发现[10-13]它是一种非特异性血清学反应，腺病毒感染、流感、肝硬化、自身免疫性溶血性贫血、螺旋体病均可产生假阳性。所以冷凝集试验检测抗体确诊较困难[14]。而酶联免疫吸附试验应用吸附于载体表面的抗原，与相应抗体结合后形成免疫复合物，与酶标记的第二抗体结合后形成免疫反应，借助酶对底物发生降解作用后显现的颜色反应进行判断。在本研究中表现很高的特异性和敏感性。有学者对肺炎支原体感染患者进行酶联免疫吸附试验，结果发现在发病后4～7周依靠此方法即可检出肺炎支原体感染。而且有学者还指出该抗体还可作为亚急性感染的补充诊断，阳性率与病情呈正比。但是我们要注意到肺炎支原体感染早期（1～3 d）患者体内还未产生足够被检测出的抗体，所以酶联免疫吸附试验不能做到早期诊断。
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（收稿日期：2014-11-13）
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