检查（fine needle aspiration cytology， FNAC）的涂片制作及巴氏染色过程，出现的影响涂片质量的因素。方法 对1742例甲状腺FNA涂片，采用巴氏染色法染色后镜下观察结果。结果 镜下可观察到甲状腺滤泡上皮细胞核和胞浆均呈蓝绿色，易区分。细胞核毛玻璃结构，核沟、核内包涵体等可见。结论 甲状腺FNA涂片涂片后一定要及时固定，否则易肿胀变形，不易诊断。染色时需准确把握苏木素染色时间，盐酸酒精分化时间，才能使染色后胞核与胞浆着色分明，易区分。涂片固定时间过久、盐酸酒精浓度过低，穿刺时出血较多、涂片过厚等都会影响红细胞着色。
关键词：甲状腺FNA；细胞学涂片；巴氏染色
中图分类号：R472.3 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）19-0176-02
甲状腺FNA，是一种安全、快速的检查手段，对于患者的创伤小，且对甲状腺疾病性质的诊断准确性高[1-2]。经超声引导下甲状腺细针穿刺（US-FNA），还可对微小结节进行穿刺[3]，有助于病变的早期发现、合理治疗。而对甲状腺疾病的明确诊断需要依靠病理学，因此，提高甲状腺FNA涂片的质量，对于甲状腺疾病性质的诊断至关重要。
1资料与方法
1.1一般资料
以2016年本科室甲状腺FNA行细胞学检查的病例为研究对象，共有1742例被纳入本研究。纳入标准：经B超检查需进行甲状腺FNA病例；患者及家属同意或要求行甲状腺FNA细胞学检查。男性408例，女性1334例；年龄14～84岁。
1.2 方法
1.2.1 甲状腺FNA细针穿刺涂片经B超引导下进行甲状腺结节细针穿刺，对穿刺出的组织进行抹片。组织尽量涂抹均匀，然后将涂片放入95%酒精中固定30 min。
1.2.2 巴氏染色先将涂片浸入75%的酒精溶液1 s左右，水洗后用苏木素染液染色3～5 min，再放入1.5%的盐酸酒精溶液中5～10 s，经水洗，再依次过75%、95%的酒精溶液约10 s，然后放入EA/OG溶液中3～5 min，染色后依次过95%的酒精溶液和无水酒精，最后浸入二甲苯溶液，湿封后镜检。
2结果
甲状腺FNA细胞学涂片，经巴氏染色后镜下观察。可见甲状腺滤泡上皮细胞，核呈蓝绿色，胞浆呈蓝绿色。胶质成红色或蓝绿色，红细胞呈淡蓝色或淡粉色，见图1。
经统计195例甲状腺细胞学涂片镜下观察到滤泡上皮成分较少。其中164例无法准确诊断，需进一步检查。22例诊断为甲状腺囊性变，3例意义不明确的非典型性变，2例亚急性甲状腺炎，1例嗜酸性变。滤泡上皮成分少可能与甲状腺结节小，结节本身病变性质有关。在染色过程中，有少数涂片出现脱片现象，通常出现在胶质结节中。可能是由于穿刺出的胶质多，抹片时胶质较厚而引起的。
在巴氏染色过程中发现：涂片固定时间过久，如超过72 h；或使用浓度过低的盐酸酒精溶液分化，会出现红细胞着色明显，见图2。这些红细胞会遮挡所需观察的甲状腺滤泡上皮细胞，进而影响诊断。苏木素染色时间太短，胞浆和核不易区分；染色时间过长，胞核着色深，无法观察核沟和核内假包涵体。通过盐酸酒精的分化，可有效分化胞核苏木素着色，淡化涂片中EA/OG液对红细胞着色。
3讨论
甲状腺FNAC是细胞病理学的重要组成部分，其诊断结果与组织学诊断结果符合率较高[4]。一些微小乳头状癌病例，由于术后大体标本取材未取到穿刺时相应的部位，而导致其诊断结果与细胞学结果不符。通常，影像学检查无法明确甲状腺疾病的性质，而甲状腺FNAC对于鉴别甲状腺结节的良恶性具有较高的准确度和敏感度[5]。但是，甲状腺FNAC对于滤泡性肿瘤良恶性无法鉴别。故影像学检查结合病理诊断，可以更有效、准确地确定甲状腺疾病的性质[6]。
在所有甲状腺FNA涂片中，有195例甲状腺细胞学涂片中滤泡上皮细胞含量较少，其中的164例无法诊断。这与操作者的穿刺技术，以及结节的大小、位置等因素有关[7]。手无法触及的微小结节，经超声引导下可准确定位。一些出血皱缩的甲状腺结节，穿刺出的组织量相对较少，也会出现细胞涂片中滤泡上皮成分较少的情况。
此外，有63例涂片镜下可见血性成分，其中45例滤泡上皮成分少，无法明确诊断，仅8例为甲状腺出血囊性变，镜下可见组织细胞。对于无法明确诊断的病例，我们不能排除血液成分遮挡甲状腺滤泡上皮细胞，而导致观察到的细胞量较少。抑或穿刺时出血而影响了穿刺出的细胞量。经过巴氏染色，绝大部分的红细胞在盐酸酒精溶液的影响下，着色较淡。但出血囊性变的结节，或者结节周围血供较丰富时，穿刺时易引起出血。当穿刺的血液成分过多，涂片较厚时，盐酸酒精溶液对红细胞着色的淡化不明显。
染色时，苏木素染色一般3～5 min，染色后的核浆易区分，且毛玻璃结构、核沟、核内假包涵体明显可见。若苏木素染色时间过短，胞核和胞浆着色浅，不易区分；染色时间过久，核深染，核沟、核内假包涵体等病理特征不易观察。经1%～1.5%的盐酸酒精溶液作用后，红细胞着色淡。但血液成分较多且涂片较厚，固定過久或者使用浓度较低的盐酸酒精染色，红细胞均正常着色，淡化不明显。因此，穿刺后的涂片一定要及时固定，但不能固定时间过久。一般来说，经95%酒精溶液固定半个小时后即可进行巴氏染色，固定的时间最好不要超过48 h。染色时宜用1%～1.5%浓度的盐酸酒精溶液，一般需分化5～10 s。盐酸酒精浓度过高，引起所有细胞损伤。
总之，甲状腺细针穿刺细胞学涂片的质量受多种因素的影响，如穿刺的规范及准确操作，细胞涂片后的及时固定，巴氏染色时苏木素染色时间及盐酸酒精溶液的浓度和染色时间。在制片时，要及时固定、准确把握苏木素染色时间和盐酸酒精溶液分化时间，以平衡甲状腺滤泡上皮细胞核与胞浆的着色，有效地提高涂片制作的质量。
参考文献：
[1]马腾，朱强，石文媛，等. 超声引导下细针抽吸细胞学检查对甲状腺结节的诊断价值[J].中国耳鼻喉头颈外科，2015（10）：507-509.
[2]陈娅娅，严赟，司徒明珠，等. 超声引导下负压细针抽吸细胞学检查对甲状腺结节诊断价值[J]. 现代实用医学，2015（9）：1232-1234.
[3]周伟，倪晓枫，叶廷军，等.超声引导下小于5mm甲状腺结节细针穿刺细胞学与超声评估的应用价值[J].2014（1）：7-10.
[4]陈茂胜.甲状腺细针穿刺细胞学检查在甲状腺结节诊断中的应用[J].2016，10（18）：1065-1067.
[5]韦明. 超声引导下细针穿刺细胞学检查对甲状腺良恶性结节的诊断价值[J]. 临床医学研究与实践， 2016， 1（10）：84-84.
[6]严佳梅，黄品同，游向东，等.超声造影结合细针穿刺对甲状腺癌的诊断价值[J].中华超声影像学杂志，2014，23（3）：222-226.
[7]邬宏恂，张冰洁，臧亚萍，等.甲状腺结节超声引导下细针抽吸细胞学无法诊断结果影响因素分析[J].临床超声医学杂志，2014（8）：523-526.
编辑/李桦
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